Implementación y evaluación del ensayo amplificación isotérmica mediada por un lazo (lamp)para detección de brucella abortus en muestras biológicas de bovinos
Brucelosis bovina es un enfermedad infecto-transmisible provocada por Brucella abortus que se caracteriza por afectar principalmente al tracto reproductivo de hembras adultas. Esta enfermedad causa grandes impactos en el sector económico y representa una gran problemática en la salud pública. En el...
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2017
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| author | Chuva Coyago, Doris Alexandra |
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| description | Brucelosis bovina es un enfermedad infecto-transmisible provocada por Brucella abortus que se caracteriza por afectar principalmente al tracto reproductivo de hembras adultas. Esta enfermedad causa grandes impactos en el sector económico y representa una gran problemática en la salud pública. En el presente trabajo se planteó implementar un ensayo LAMP empleando material genético de las cepas vacunales de B. abortus RB51 y S19 inoculado y extraído de muestras de leche (1 X 106 – 1 X 100 UFC/ml leche) y tejidos de nódulos linfáticos (10 X 106 – 10 X 100 UFC/g tejido) de bovinos, posteriormente evaluar la sensibilidad analítica recurriendo a diferentes métodos de detección. Lográndose obtener ADN de B. abortus susceptible de ser amplificado en las muestras de leche, estableciendo un nivel de sensibilidad analítica mediante electroforesis en gel de agarosa-TAE teñido con Bromuro de etidio de 10 UFC/ml de leche, y la misma sensibilidad mediante el uso de SYBR green para la detección de fluorescencia, con éste colorante bajo luz natural se observó un cambio de color del naranja al verde así como un aumento de fluorescencia en las muestras positivas. En lo que respecta a tejidos inoculados con las cepas vacunales se observó gran variabilidad en la amplificación del ADN total por lo que no se obtuvo un ensayo confiable al aplicar el método LAMP para la detección de B. abortus presumiéndose la presencia de inhibidores de origen endógeno en los tejidos de nódulos linfáticos. |
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| institution | Universidad de Cuenca |
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| spelling | oai:dspace.ucuenca.edu.ec:123456789-284772018-04-24T09:01:12Z Implementación y evaluación del ensayo amplificación isotérmica mediada por un lazo (lamp)para detección de brucella abortus en muestras biológicas de bovinos Chuva Coyago, Doris Alexandra Vallecillo Maza, Antonio Javier Brucelosis Bovina Sencibilidad Analitica Leche Brucella Abortus Brucelosis bovina es un enfermedad infecto-transmisible provocada por Brucella abortus que se caracteriza por afectar principalmente al tracto reproductivo de hembras adultas. Esta enfermedad causa grandes impactos en el sector económico y representa una gran problemática en la salud pública. En el presente trabajo se planteó implementar un ensayo LAMP empleando material genético de las cepas vacunales de B. abortus RB51 y S19 inoculado y extraído de muestras de leche (1 X 106 – 1 X 100 UFC/ml leche) y tejidos de nódulos linfáticos (10 X 106 – 10 X 100 UFC/g tejido) de bovinos, posteriormente evaluar la sensibilidad analítica recurriendo a diferentes métodos de detección. Lográndose obtener ADN de B. abortus susceptible de ser amplificado en las muestras de leche, estableciendo un nivel de sensibilidad analítica mediante electroforesis en gel de agarosa-TAE teñido con Bromuro de etidio de 10 UFC/ml de leche, y la misma sensibilidad mediante el uso de SYBR green para la detección de fluorescencia, con éste colorante bajo luz natural se observó un cambio de color del naranja al verde así como un aumento de fluorescencia en las muestras positivas. En lo que respecta a tejidos inoculados con las cepas vacunales se observó gran variabilidad en la amplificación del ADN total por lo que no se obtuvo un ensayo confiable al aplicar el método LAMP para la detección de B. abortus presumiéndose la presencia de inhibidores de origen endógeno en los tejidos de nódulos linfáticos. Bovine brucellosis is an infectious-transmissible disease caused by Brucella abortus, which is characterized by mainly affecting the reproductive tract of adult females. This disease causes great impacts in the economic sector and represents a great problem in public Health. In the present work we proposed to implement a LAMP assay using genetic material from the B. abortus RB51 and S19 vaccine strains inoculated and extracted from bovine milk (1 X 106 - 1 X 100 CFU/ml milk) and lymph node (10 X 106-10 X 100 UFC/g tissue) samples, and then evaluate the analytical sensitivity using different detection methods. Obtaining DNA from B. abortus susceptible to being amplified in the milk samples, establishing a level of analytical sensitivity by agarose-TAE gel electrophoresis stained with Ethidium bromide of 10 CFU/ml milk, and the same sensitivity by use SYBR green for fluorescence detection, with this dye under natural light was observed a change of color from orange to green as well as an increase of fluorescence in the positive samples. As regards tissues inoculated with the vaccine strains, great variability was observed in the amplification of the total DNA. Therefore, it did not obtain a reliable assay when applying the LAMP method for the detection of B. abortus presuming the presence of inhibitors of endogenous origin in the tissues of lymph nodes. Médico Veterinario Zootecnista Cuenca 2017-11-14T20:26:57Z 2017-11-14T20:26:57Z 2017 bachelorThesis http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/28477 spa tv;302 application/pdf application/pdf |
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