Implementación del método amplificación isotérmica mediada por un lazo (LAMP) para la detección de Toxoplasma gondii en muestras sanguíneas de gatos (Felis catus)
Toxoplasmosis es una enfermedad parasitaria, cuyo agente etiológico es un protozoo llamado Toxoplasma gondii, este parásito es el responsable de una de las infecciones parasitarias más comunes en humanos y animales de sangre caliente, siendo los felinos los únicos hospedadores definitivos. Varias...
| Main Author: | |
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| Other Authors: | |
| Format: | masterThesis |
| Language: | spa |
| Published: |
Universidad de Cuenca
2020
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| Online Access: | http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/34686 |
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| author | Aguirre Serrano, María Fernanda |
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| description | Toxoplasmosis es una enfermedad parasitaria, cuyo agente etiológico es un protozoo llamado Toxoplasma gondii, este parásito es el responsable de una de las infecciones parasitarias más comunes en humanos y animales de sangre caliente, siendo los felinos los únicos hospedadores definitivos. Varias técnicas de diagnóstico han sido empleadas para detectar T. gondii en todo tipo de muestras, siendo hasta la fecha las técnicas indirectas ELISA y PCR las más confiables, pero así mismo no muy asequibles por el costo que representan. El comportamiento errático del parásito no facilita su detección en todas las etapas de vida del parásito en el organismo del animal, por lo que nos puede arrojar resultados falso negativos, aunque el animal si haya padecido en algún momento de su vida la enfermedad. En el presente trabajo se planteó implementar un ensayo LAMP para detectar material genético de T. gondii en muestras sanguíneas de gatos (Felis catus domesticus) sin distinción de raza, edad o sexo, cuya característica principal era mantener contacto directo con el medio exterior, tener hábitos de caza y no tener acceso a un arenero, factores de riesgo que exponen al animal a adquirir más fácilmente la enfermedad. Se obtuvo ADN total de 100 muestras y se aplicó el método LAMP. Los resultados obtenidos mostraron 1 muestra positiva a T. gondii. Luego con este resultado se hizo una comparación con el estudio de seroprevalencia de T. gondii en la Ciudad de Cuenca utilizando la técnica de Inmunofluorescencia indirecta con 300 muestras sanguíneas de gatos de los cuales hubo 48 muestras seropositivas. Aunque los dos ensayos difieren en la metodología, cantidad de muestras y no pertenecen a los mismos individuos, los resultados positivos concuerdan en estar expuestos a los mismos factores de riesgo. El análisis estadístico aplicado la prueba de Diferencia de proporciones, se encontró que hay una diferencia significativa entre ambos ensayos, siendo el ensayo de serodiagnóstico más específico para este tipo de muestras. Sin embargo, aunque LAMP no haya mostrado una mayor cantidad de resultados positivos, se puede atribuir a que el tipo de muestra (sangre) no es el más adecuado para la identificación de ADN de T. gondii. |
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| spelling | oai:dspace.ucuenca.edu.ec:123456789-346862020-08-26T06:00:28Z Implementación del método amplificación isotérmica mediada por un lazo (LAMP) para la detección de Toxoplasma gondii en muestras sanguíneas de gatos (Felis catus) Aguirre Serrano, María Fernanda Teófilo Estuardo Palacios Ordoñez Medicina Veterinaria Toxoplasmosis Gatos Patología animal Toxoplasmosis es una enfermedad parasitaria, cuyo agente etiológico es un protozoo llamado Toxoplasma gondii, este parásito es el responsable de una de las infecciones parasitarias más comunes en humanos y animales de sangre caliente, siendo los felinos los únicos hospedadores definitivos. Varias técnicas de diagnóstico han sido empleadas para detectar T. gondii en todo tipo de muestras, siendo hasta la fecha las técnicas indirectas ELISA y PCR las más confiables, pero así mismo no muy asequibles por el costo que representan. El comportamiento errático del parásito no facilita su detección en todas las etapas de vida del parásito en el organismo del animal, por lo que nos puede arrojar resultados falso negativos, aunque el animal si haya padecido en algún momento de su vida la enfermedad. En el presente trabajo se planteó implementar un ensayo LAMP para detectar material genético de T. gondii en muestras sanguíneas de gatos (Felis catus domesticus) sin distinción de raza, edad o sexo, cuya característica principal era mantener contacto directo con el medio exterior, tener hábitos de caza y no tener acceso a un arenero, factores de riesgo que exponen al animal a adquirir más fácilmente la enfermedad. Se obtuvo ADN total de 100 muestras y se aplicó el método LAMP. Los resultados obtenidos mostraron 1 muestra positiva a T. gondii. Luego con este resultado se hizo una comparación con el estudio de seroprevalencia de T. gondii en la Ciudad de Cuenca utilizando la técnica de Inmunofluorescencia indirecta con 300 muestras sanguíneas de gatos de los cuales hubo 48 muestras seropositivas. Aunque los dos ensayos difieren en la metodología, cantidad de muestras y no pertenecen a los mismos individuos, los resultados positivos concuerdan en estar expuestos a los mismos factores de riesgo. El análisis estadístico aplicado la prueba de Diferencia de proporciones, se encontró que hay una diferencia significativa entre ambos ensayos, siendo el ensayo de serodiagnóstico más específico para este tipo de muestras. Sin embargo, aunque LAMP no haya mostrado una mayor cantidad de resultados positivos, se puede atribuir a que el tipo de muestra (sangre) no es el más adecuado para la identificación de ADN de T. gondii. Toxoplasmosis is a parasitic disease, which etiologic agent is a protozoan called Toxoplasma gondii. This parasite is responsible for one of the most common parasitic infections in humans and warm-blooded animals, being cats the only definitive hosts. Several diagnostic techniques have been used to find T. gondii in all types of samples, with the indirect ELISA methodology and direct PCR being the most reliable but not very affordable by the cost. The erratic behavior of the parasite does not facilitate the possibility of finding positive results throughout the life cycle of the parasite in the organism of the animal, so it can give us false negative results, although the animal has suffered the disease at some point in its life. The present study proposed to implement a LAMP test to detect genetic material of T. gondii in blood samples of cats (Felis catus domesticus) without distinction of race, age or sex, which main characteristic was to maintain direct contact with the outside environment, to have hunting habits and not having access to a sandbox, risk factors that expose the animal to acquire the disease more easily. Total DNA was obtained from 100 samples and the LAMP method was applied; the results showed 1 positive sample to Toxoplama gondii. Then with this result a comparison was made with the study of Seroprevalence of T. gondii in the City of Cuenca using the Indirect Inmunofluorescence technique with 300 blood samples from cats of which 48 were positive samples. Although the two trials differ in methodology, number of samples and do not belong to the same individuals, the positive results agree to be exposed to the same risk factors. The statistical analysis applied with the Difference of proportions test, found that there is a significant difference between both tests, being the most specific the Serodiagnosis. Despite, LAMP has not shown a greater amount of positive results, it can be attributed to the fact that the type of sample (blood) is not the most suitable for the study of Toxoplasmosis. Magíster en Medicina Canina y Felina Cuenca 2020-07-29T17:18:13Z 2020-07-29T17:18:13Z 2019-11-19 masterThesis http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/34686 spa TM4A;159 Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ openAccess application/pdf 49 páginas application/pdf Universidad de Cuenca |
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