Evaluación de la eficiencia de un ensayo LAMP para la identificación de material genético de Toxoplasma gondii en leche bovina
El Toxoplasma gondii es un parásito protozoario zoonótico, considerado de gran importancia ya que es contemplado como un problema de salud pública y que afecta a población vulnerable por eso es necesario la implementación de un método diagnostico que sea seguro y confiable. En la actualidad el e...
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| Format: | bachelorThesis |
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| Published: |
Universidad de Cuenca
2022
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| author | Aguilar Criollo, Juan Francisco Belesaca Suqui, Pablo Ricardo |
| author2 | Palacios Ordóñez, Teófilo Estuardo |
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| description | El Toxoplasma gondii es un parásito protozoario zoonótico, considerado de gran
importancia ya que es contemplado como un problema de salud pública y que afecta a
población vulnerable por eso es necesario la implementación de un método diagnostico
que sea seguro y confiable.
En la actualidad el ensayo LAMP ha demostrado ser una prueba diagnóstica rentable
para distintos microrganismos de carácter infeccioso. El objetivo de este estudio fue
evaluar la eficiencia de la técnica molecular LAMP para la identificación de material
genético de Toxoplasma gondii en leche de vacas cuyo destino productivo sea la
elaboración de quesillo o queso de forma artesanal. Se obtuvo 100 muestras de leche
provenientes de 100 vacas, posteriormente se elaboró alícuotas de cada muestra para
su almacenamiento a -80 °C y extracción del ADN purificados siguiendo el método de
Ghaheri para la purificación del mismo.
En el ADN purificado se realizó un control de proceso para asegurar que las muestras
obtenidas sean correctas esto mediante un ensayo LAMP el cual se realiza utilizando
un set de primers para la amplificación de ADN de B. Taurus, se realizó una
electroforesis en gel de agarosa y posteriormente se fotodocumentó el resultado.
Luego se realizó un ensayo LAMP para verificar la presencia o no de material genético
de Toxoplasma gondii siguiendo exactamente los mismos pasos que se utilizó en el
ensayo LAMP para el control de proceso con la diferencia que se utilizó un set de primers
específicos para amplificación de material genético de T. gondii.
El resultado del control de proceso fue favorable, el 100% de las muestras obtenidas
fueron positivas lo que confirma que las muestras se extrajeron, transportaron y
almacenaron correctamente. Por otro lado el ensayo LAMP para amplificación de
material genético de T. gondii fue negativo en todas las muestras.
Este estudio concluye que el ensayo LAMP para amplificar material genético de
Toxoplasma gondii no tuvo resultados positivos esto puede deberse a varios factores
como: las condiciones climáticas del lugar, presencia de vectores, la sobrevivencia del
parásito en el organismo de las vacas, Etc. Por lo tanto no se puede descartar
definitivamente este método para el diagnóstico de T. gondii. |
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El objetivo de este estudio fue evaluar la eficiencia de la técnica molecular LAMP para la identificación de material genético de Toxoplasma gondii en leche de vacas cuyo destino productivo sea la elaboración de quesillo o queso de forma artesanal. Se obtuvo 100 muestras de leche provenientes de 100 vacas, posteriormente se elaboró alícuotas de cada muestra para su almacenamiento a -80 °C y extracción del ADN purificados siguiendo el método de Ghaheri para la purificación del mismo. En el ADN purificado se realizó un control de proceso para asegurar que las muestras obtenidas sean correctas esto mediante un ensayo LAMP el cual se realiza utilizando un set de primers para la amplificación de ADN de B. Taurus, se realizó una electroforesis en gel de agarosa y posteriormente se fotodocumentó el resultado. Luego se realizó un ensayo LAMP para verificar la presencia o no de material genético de Toxoplasma gondii siguiendo exactamente los mismos pasos que se utilizó en el ensayo LAMP para el control de proceso con la diferencia que se utilizó un set de primers específicos para amplificación de material genético de T. gondii. El resultado del control de proceso fue favorable, el 100% de las muestras obtenidas fueron positivas lo que confirma que las muestras se extrajeron, transportaron y almacenaron correctamente. Por otro lado el ensayo LAMP para amplificación de material genético de T. gondii fue negativo en todas las muestras. Este estudio concluye que el ensayo LAMP para amplificar material genético de Toxoplasma gondii no tuvo resultados positivos esto puede deberse a varios factores como: las condiciones climáticas del lugar, presencia de vectores, la sobrevivencia del parásito en el organismo de las vacas, Etc. Por lo tanto no se puede descartar definitivamente este método para el diagnóstico de T. gondii. Toxoplasma gondii is a zoonotic protozoan parasite, considered of great importance since it is considered a public health problem and it affects a vulnerable population due to the need to implement a safe and reliable diagnostic method. Currently, the LAMP assay has proven to be a cost-effective diagnostic test for infectious microorganisms. The objective of this study was to evaluate the efficiency of the LAMP molecular technique for the identification of genetic material of Toxoplasma gondii in milk from cows whose productive destination is the production of quesillo or cheese in an artisanal way. 100 milk samples from 100 cows were obtained, subsequently aliquots of each sample were made for storage at -80 °C and purified DNA extraction following the Ghaheri method for purification. The purified DNA was made a process control to ensure that the samples obtained are correct, this by means of a LAMP assay which is carried out using a primer kit for the amplification of Bos Taurus DNA, where an agar gel was subsequently made to amplify it with electrophoresis and culminating with the photodocumentator to observe the results. Then, a LAMP assay was performed to verify the presence or not of Toxoplasma gondii genetic material following exactly the same steps that were used in the LAMP assay for process control with the difference that a different primer kit was used so that the DNA of T. gondii can be amplified. The result of the process control was favorable, 100% of the samples obtained were positive, which confirms that the samples were extracted, transported and stored correctly. On the other hand, the LAMP assay for amplification of genetic material of T. gondii was negative in all samples. This study concluding that the LAMP assay to amplify genetic material of Toxoplasma gondii did not have positive results, this may be due to several factors such as: the climatic conditions of the place, the presence of vectors, and the survival of the parasite in the organism of the cows. Etc. Therefore, this method cannot be definitively ruled out for the diagnosis of T. gondii. Médico Veterinario Zootecnista Cuenca 2022-08-02T20:35:36Z 2022-08-02T20:35:36Z 2022-08-01 bachelorThesis http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/39561 spa TV;404 Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ openAccess application/pdf 44 páginas application/pdf Universidad de Cuenca |
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