Optimización experimental de un método cromatográfico HPLC-DAD para el análisis de polifenoles en frutas
El objetivo del presente estudio fue desarrollar y optimizar un método de HPLC-DAD para el análisis de polifenoles en frutas. Para los experimentos se utilizaron estándares de nueve compuestos fenólicos, se realizaron pruebas iniciales aplicando condiciones obtenidas de publicaciones científicas....
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| Format: | bachelorThesis |
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| Published: |
2018
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| author | Saquicela Carpio, Jorge Eduardo |
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| description | El objetivo del presente estudio fue desarrollar y optimizar un método de HPLC-DAD para el análisis de polifenoles en frutas.
Para los experimentos se utilizaron estándares de nueve compuestos fenólicos, se realizaron pruebas iniciales aplicando condiciones obtenidas de publicaciones científicas. La optimización del método se llevó a cabo mediante el uso de un diseño factorial, seguido de un diseño central compuesto y de un test de deseabilidad para determinar la influencia de las variables velocidad de flujo, temperatura de columna y acidificación de la fase móvil en la variable respuesta eficiencia. A través de las pruebas de optimización, se determinaron las condiciones cromatográficas óptimas propuestas por los modelos. Posteriormente, se aplicó el método analítico optimizado en muestras de mango liofilizadas extraídas por un método desarrollado previa revisión bibliográfica.
En el diseño factorial, se observó un bajo ajuste del modelo siendo la variable acidificación de fase móvil no significativa. Existió una mejora de ajuste con el diseño central compuesto. Se demostró una influencia heterogénea de las variables analizadas sobre la eficiencia cromatográfica. La prueba de deseabilidad propuso las condiciones óptimas de 0.64 mL/min para el flujo y 29.1°C para la temperatura de columna, esta propuesta fue de poca aplicabilidad por razones prácticas. Finalmente, se obtuvo un método de 43.5 min a las longitudes de onda óptimas de 254, 280 y 320 nm. Se obtuvieron cromatogramas con picos resueltos para las muestras de mango con una variación aceptable (4.4 - 7.6 %CV), denotando la aplicabilidad del método optimizado y la utilidad del método de extracción. En las muestras se logró identificar y cuantificar 4 de 9 compuestos fenólicos analizados. Por otro lado, se observó la necesidad de corroboración de recuperación y de aplicación del método en otras matrices. |
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| institution | Universidad de Cuenca |
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| spelling | oai:dspace.ucuenca.edu.ec:123456789-308532021-03-18T00:14:11Z Optimización experimental de un método cromatográfico HPLC-DAD para el análisis de polifenoles en frutas Saquicela Carpio, Jorge Eduardo Ortiz Ulloa, Silvia Johana Bioquímica Polifenoles Frutas Diseño factorial Extracción Mango Cromatografía El objetivo del presente estudio fue desarrollar y optimizar un método de HPLC-DAD para el análisis de polifenoles en frutas. Para los experimentos se utilizaron estándares de nueve compuestos fenólicos, se realizaron pruebas iniciales aplicando condiciones obtenidas de publicaciones científicas. La optimización del método se llevó a cabo mediante el uso de un diseño factorial, seguido de un diseño central compuesto y de un test de deseabilidad para determinar la influencia de las variables velocidad de flujo, temperatura de columna y acidificación de la fase móvil en la variable respuesta eficiencia. A través de las pruebas de optimización, se determinaron las condiciones cromatográficas óptimas propuestas por los modelos. Posteriormente, se aplicó el método analítico optimizado en muestras de mango liofilizadas extraídas por un método desarrollado previa revisión bibliográfica. En el diseño factorial, se observó un bajo ajuste del modelo siendo la variable acidificación de fase móvil no significativa. Existió una mejora de ajuste con el diseño central compuesto. Se demostró una influencia heterogénea de las variables analizadas sobre la eficiencia cromatográfica. La prueba de deseabilidad propuso las condiciones óptimas de 0.64 mL/min para el flujo y 29.1°C para la temperatura de columna, esta propuesta fue de poca aplicabilidad por razones prácticas. Finalmente, se obtuvo un método de 43.5 min a las longitudes de onda óptimas de 254, 280 y 320 nm. Se obtuvieron cromatogramas con picos resueltos para las muestras de mango con una variación aceptable (4.4 - 7.6 %CV), denotando la aplicabilidad del método optimizado y la utilidad del método de extracción. En las muestras se logró identificar y cuantificar 4 de 9 compuestos fenólicos analizados. Por otro lado, se observó la necesidad de corroboración de recuperación y de aplicación del método en otras matrices. The aim of the present study was to develop and optimize a HPLC-DAD method for the analysis of polyphenols in fruits. For the experiments, standards of nine phenolic compounds were used, initial runs were performed with conditions based on scientific papers. Method optimization was carried out by using a factorial design, followed by a central composite design and a desirability test to determine the influence of the variables flow rate, column temperature and acidification of the mobile phase on the response variable efficiency. Through the optimization tests, the optimal chromatographic conditions proposed by the models were determined. Next, the optimized analytical method was applied on lyophilized mango samples extracted by a method developed utilizing literature review. In the factorial design, a low adjustment of the model was observed and the variable acidification of the mobile phase was not significant. There was an adjustment improvement with the composite central design. A heterogeneous influence of the variables analyzed on the chromatographic efficiency was demonstrated. The desirability test proposed the optimal conditions of 0.64 mL / min for the flow rate and 29.1°C for the column temperature, this proposal was of little applicability for practical reasons. At last, a final method of 43.5 min was obtained at the optimal wavelengths of 254, 280 and 320 nm. Chromatograms with resolved peaks were obtained for mango samples with an acceptable variation (4.4 - 7.6% CV), denoting the applicability of the optimized method and the utility of the extraction method. In the samples, 4 out of 9 phenolic compounds analyzed were identified and quantified. On the other hand, the need for corroboration of analytical recovery and application of the method in other matrices was observed. Bioquímico Farmacéutico Cuenca 2018-07-30T16:33:47Z 2018-07-30T16:33:47Z 2018-07-16 bachelorThesis http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/30853 spa TBQ;724 application/pdf application/pdf |
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