| Summary: | Las talasemias son enfermedades hereditarias que resultan de defectos genéticos que
causan una alteración en la síntesis de las cadenas de globina. La β-talasemia engloba un
conjunto de mutaciones que provocan defectos en las cadenas β-globina. La mutación 27/28
+C, se caracteriza por la inserción de un nucleótido de citosina que provoca un cambio en el
marco de lectura del gen dando lugar a la β-talasemia. Aunque se han reportado pocos casos
en países donde la prevalencia de β-talasemia es muy alta, la información sobre esta
mutación en Latinoamérica resulta escasa. Sin embargo, datos no publicados han identificado
esta mutación de forma prevalente en la población ecuatoriana. El presente trabajo de
titulación tuvo como objetivo principal estandarizar un protocolo PCR para la amplificación del
polimorfismo rs35532010 del gen de la hemoglobina subunidad beta (HBB). Se emplearon
muestras de ADN comercial y cebadores específicos para amplificar el fragmento del gen en
donde se ubica dicha mutación. Se realizaron tres distintos protocolos para la
estandarización, siendo el primer ensayo el que permitió establecer las condiciones ideales
de 1μl de ADN diluido a 80ng/μl, a una temperatura de alineación 64oC, para la identificación
del fragmento mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%. Sin embargo, se recomienda
el uso de gel de poliacrilamida, de mayor resolución y amplio rango de separación, para
mejorar la visualización de las bandas. La estandarización de este protocolo será de gran
utilidad para una posterior secuenciación y así determinar el estado de cigosidad alélica en
pacientes con β-talasemia.
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